科研汪们废寝忘食、不分昼夜地做实验搞科研,数据、文章都完美无瑕。到最后投稿这一哆嗦,期刊要求必须出具细胞株STR鉴定报告,实验汪们那时才意识到科研竟有如此操作!!
急急忙忙做鉴定,结果竟是其他细胞(大部分是万恶的Hela细胞),此时才万念俱灰!!!
什么是细胞株STR鉴定?
STR(Short Tandem Repeat)即短串联重复序列,其基因位点是由长度为3~7个碱基对的短串连重复序列组成,这些短串联重复序列广泛存在于人类基因组中,可作为高度多态性标记,被称为细胞的DNA指纹。
为什么要做STR鉴定?
据统计约30%细胞系被交叉污染或错误辨识,因使用了交叉污染或错误辨识的细胞而导致研究结论错误、结果不可重复、临床细胞治疗灾难性后果……,这浪费大量时间、精力和金钱。因此,科研汪们最好在开展课题前提早做细胞株鉴定,确定细胞是否存在问题;而阶段性的鉴定也是必须的,因为细胞经过反复传代后(5代以上),突变和交叉污染的几率极大
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细胞株STR鉴定流程
(1) 首先是提取细胞的基因组DNA,提取后需进行质量鉴定,即OD260/OD280=1.8-2.0。
(2) 荧光引物PCR扩增STR位点。
(3) 扩增产物经过毛细管电泳,获得细胞基因的分型结果
(4) STR的数据库比对,比对数据库为美国的ATCC细胞库,德国的DSMZ细胞库,日本的JCRB细胞库。
STR鉴定案例——THP-1细胞STR鉴定分析
1、细胞THP-1的STR分型图谱
2、STR 位点分型结果
检测样本位点数据与ATCC标准数据的匹配率为100%。